Продукциялар
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR 2019-nCoV үчүн аныктоочу комплект
Күтүлгөн колдонуу
Бул комплект жаңы коронавирусту (2019-nCoV) кекиртек тампондорун, мурун-жутуучу тампондорду, бронхоальвеолярдык жуугуч суюктуктарды, какырыкты колдонуу менен сапаттуу аныктоо үчүн колдонулат. Бул продуктунун аныктоонун натыйжасы клиникалык маалымат үчүн гана колдонулат жана аны жалгыз катары колдонууга болбойт. клиникалык диагностика жана дарылоо үчүн далилдер.Абалдын комплекстүү анализи пациенттин клиникалык көрүнүштөрү жана башка лабораториялык изилдөөлөр менен бирге сунушталат.
Текшерүү принциби
Комплект бир кадамдуу RT-ПЦР технологиясына негизделген.Чынында, 2019-жылдын жаңы коронавирусунун (2019-nCoV) ORF1ab жана N гендери күчөтүү максаттуу аймактары катары тандалган.Өзгөчө праймерлер жана флуоресценттик зонддор (N ген зонддору FAM менен белгиленет жана ORF1ab зонддору HEX менен белгиленет) үлгүлөрдөгү 2019 жаңы типтеги коронавирус РНКсын аныктоо үчүн иштелип чыккан.Комплект ошондой эле үлгүлөрдү чогултуу, РНК жана ПЦР күчөтүү процессине мониторинг жүргүзүү жана муну менен жалган терс натыйжаларды азайтуу үчүн эндогендик ички контролду аныктоо тутумун (CY5 менен белгиленген ички башкаруу генинин зондун) камтыйт.
Негизги компоненттер
| Компоненттер | Көлөм（48T/Kit） |
| RT-PCR реакциясынын эритмеси | 96μл |
| nCOV праймери TaqMan зонд аралашмасы (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864μл |
| Терс көзөмөл | 1500μл |
| nCOV Позитивдүү контроль (l ORF1ab N Гене) | 1500μл |
Өз реагенттери: РНКны экстракциялоо же тазалоочу реагенттер.Терс/оң башкаруу: оң башкаруу максаттуу фрагментти камтыган РНК, ал эми терс башкаруу нуклеин кислотасы жок суу.Колдонуу учурунда алар экстракцияга катышууга тийиш жана жугуштуу деп эсептелиши керек.Аларды тиешелүү ченемдерге ылайык иштетүү жана утилдештирүү керек.
Ички шилтеме ген адамдын RnaseP гени болуп саналат.
Сактоо шарттары жана жарактуулук мөөнөтү
-20±5℃, 6 айга жарактуу 5 жолудан ашык кайталап тоңдуруудан жана эрүүдөн сактаңыз.
Колдонулуучу аспап
FAM / HEX / CY5 жана башка көп каналдуу флуоресценттик ПТР аспабы менен.
Үлгү талаптары
1. Колдонулуучу үлгүлөрдүн түрлөрү: тамак тампондору, мурун-жуткун тампондору, бронхоальвеолярдык жуугуч суюктук, какырыктын.
2. Үлгүлөрдү чогултуу (асептикалык техника)
Фаренгеалдык тампон: Бадам бездерин жана фарингенин арткы дубалын бир эле учурда эки тампон менен сүртүңүз, андан кийин тампондун башын үлгү алуу эритмеси бар пробиркага чөмтүрүңүз
Какырык: Оорулуу терең жөтөлгөндөн кийин, жөтөлгөн какырыкты үлгү алуу эритмеси бар бурама капкак пробиркага чогултуңуз;бронхоальвеолярдык жуугуч суюктук: медициналык адистер тарабынан үлгү алуу.3.Сактоо жана үлгүлөрдү ташуу
Вирусту изоляциялоо жана РНК тестирлөө үчүн үлгүлөр мүмкүн болушунча тезирээк текшерилиши керек.24 сааттын ичинде табылган үлгүлөрдү 4℃ температурада сактоого болот;24 ичинде аныктоо мүмкүн эмес
саат -70 ℃ же андан төмөн сакталышы керек (эгер -70 ℃ сактоо шарты жок болсо, алар сакталышы керек
-20℃ муздаткычта убактылуу сакталат).Үлгүлөрдү ташуу учурунда кайталап тоңдуруудан жана эрүүдөн качуу керек.Үлгүлөр чогултулгандан кийин мүмкүн болушунча тезирээк лабораторияга жөнөтүлүшү керек.Эгерде үлгүлөрдү узак аралыкка ташуу керек болсо, кургак муз сактоо сунушталат.
Сыноо методдору
1 Үлгүлөрдү иштетүү жана РНКны экстракциялоо (үлгүлөрдү иштетүү аймагы)
Бул РНК алуу үчүн суюк үлгүсүн 200μl алуу сунуш кылынат.Тиешелүү экстракция кадамдары үчүн, коммерциялык РНК экстракция топтомдорунун нускамаларына кайрылыңыз.Терс жана терс да
Бул комплекттин башкаруу элементтери казып алууга тартылган.
2 ПТР реагентти даярдоо (реагент даярдоо аймагы)
2.1 Комплекттин бардык компоненттерин алып салыңыз жана бөлмө температурасында эритип, аралаштырыңыз.Колдонуудан мурун бир нече секундага 8000 айн/мин центрифугалоо;реагенттердин керектүү көлөмүн эсептеп, реакция системасы төмөнкү таблицада көрсөтүлгөндөй даярдалат:
| Компоненттер | N порция (25µl системасы) |
| nCOV праймери TaqMan пробемикстурасы | 18 мкл × Н |
| RT-PCR реакциясынын эритмеси | 2 мкл × Н |
| *N = сыналган үлгүлөрдүн саны + 1 (терс көзөмөл) + 1 (nCOVоң башкаруу) | |
2.2 Компоненттерди кылдат аралаштыргандан кийин, түтүк дубалындагы бардык суюктук түтүктүн түбүнө түшүшү үчүн кыска убакытка центрифугалап, андан кийин 20 мкл күчөтүү системасын ПТР түтүкчөсүнө бөлүңүз.
3 Үлгү алуу (үлгү даярдоо аймагы)
Экстракциядан кийин 5мкл терс жана оң башкаруу элементтерин кошуңуз.Текшере турган үлгүнүн РНКсы ПТР реакциясынын түтүгүнө кошулат.
Түтүктүн капкагын бекем жаап, аны күчөтүүнү аныктоо аймагына өткөрүүдөн мурун 8000 айн/мин ылдамдыкта бир нече секундага центрифугалаңыз.
4 ПТР күчөтүү (күчөтүлгөн аныктоо аймагы)
4.1 Реакция түтүгүн прибордун үлгү уячасына салып, төмөнкүдөй параметрлерди коюңуз:
| этап | Цикл саны | Температура(°C) | Убакыт | чогултуусайт |
| Тескеритранскрипция | 1 | 42 | 10 мүнөт | - |
| Алдын ала денатурацияn | 1 | 95 | 1 мүнөт | - |
| Цикл | 45 | 95 | 15с | - |
| 60 | 30s | маалыматтарды чогултуу |
Аспапты аныктоо каналын тандоо: Флуоресценция сигналы үчүн FAM、HEX、CY5 каналын тандаңыз.Маалымдама флуоресценттүү NONE үчүн, ROX тандабаңыз.
5 Натыйжаларды талдоо (Орнотуу үчүн ар бир инструменттин эксперименталдык нускамаларын караңыз)
Реакциядан кийин натыйжаларды сактаңыз.Анализден кийин, баштапкы маанини, аяктоочу маанини жана негизги сызыктын босого маанисин сүрөткө ылайык тууралаңыз (колдонуучу чыныгы кырдаалга жараша тууралай алат, баштапкы маани 3 ~ 15ке коюлушу мүмкүн, аяктоочу мааниси 5~20, тууралоо) логарифмдик графикте Терезенин босогосунда босого сызыгы логарифмдик фазада, ал эми терс башкаруунун күчөтүү ийри сызыгы түз сызык же босого сызыгынан төмөн).
6 Сапаттык контроль (Тестке процедуралык контроль кирет) Терс көзөмөл: FAM, HEX, CY5 аныктоо каналдары үчүн айкын күчөтүү ийри сызыгы жок.
COV оң башкаруу: FAM жана HEX аныктоо каналдарынын ачык күчөтүү ийри, Ct мааниси≤32, бирок CY5 каналынын күчөтүү ийри сызыгы жок;
Жогорудагы талаптар бир эле экспериментте бир убакта аткарылышы керек;антпесе, эксперимент жараксыз жана кайталанышы керек.
7 Натыйжаларды аныктоо.
7.1 Эгерде сыноо үлгүсүнүн FAM жана HEX каналдарында күчөтүү ийри сызыгы жок же Ct мааниси> 40 болсо жана CY5 каналында күчөтүү ийри сызыгы бар болсо, анда 2019-жылдын жаңы коронавирусу (2019-nCoV) жок деп айтууга болот. үлгүдөгү РНК;
.2 Эгерде сыноо үлгүсүндө FAM жана HEX каналдарында айкын күчөтүү ийри сызыктары болсо жана Ct мааниси ≤40 болсо, үлгү 2019-жылдагы жаңы коронавирус (2019-nCoV) үчүн оң деп баалоого болот.
7.3 Эгерде сыноо үлгүсүндө FAM же HEX бир каналында гана так күчөтүү ийри сызыгы болсо жана Ct мааниси ≤40 болсо жана башка каналда күчөтүү ийри сызыгы жок болсо, натыйжаларды кайра текшерүү керек.Эгерде кайра тестирлөөнүн натыйжалары ырааттуу болсо, үлгү жаңы үчүн оң деп бааланышы мүмкүн
коронавирус 2019 (2019-nCoV).Эгерде кайра тестирлөөнүн жыйынтыгы терс болсо, үлгү 2019-жылдын жаңы коронавирусуна (2019-nCoV) терс деп баалоого болот.
Позитивдүү баа берүү
ROC ийри ыкмасы комплекттин эталондук КТ маанисин аныктоо үчүн колдонулат жана ички контролдун эталондук мааниси 40.
Тесттин натыйжаларын интерпретациялоо
1.Ар бир эксперимент терс жана оң башкаруу үчүн сыналышы керек.Сыноонун натыйжалары контроль сапатты көзөмөлдөө талаптарына жооп бергенде гана аныкталат
2.FAM жана HEX аныктоо каналдары оң болгондо, CY5 каналынан (ички башкаруу каналы) натыйжа система атаандаштыгынан улам терс болушу мүмкүн.
3.Ички контролдун натыйжасы терс болгондо, пробирканын FAM жана HEX аныктоо каналдары да терс болсо, бул система иштен чыкканын же операция туура эмес экенин билдирет, t тест жараксыз.Ошондуктан, үлгүлөрдү кайра текшерүү керек.
